產(chǎn)品規(guī)格
| 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 售價(jià) |
| FRK001 | 100T | ￥1000 |
| FRK002 | 500T | ￥3000 |
產(chǎn)品簡介
Firefly&Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以D-熒光素鉀鹽為底物來檢測螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因的活性，之后在淬滅該螢光反應(yīng)的同時(shí)，以腔腸素-h 為底物檢測海腎螢光素酶報(bào)告基因的活性。該試劑盒具有靈敏度高的特點(diǎn)，可在單個(gè)樣品中同時(shí)檢測螢火蟲和海腎熒光素酶的活性，適用于雙報(bào)告基因檢測。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
FRK001/100T | FRK002/500T |
FRK001-A/FRK002-A | 細(xì)胞裂解液 | 20 mL | 100 mL |
FRK001-B/FRK002-B | 螢火蟲熒光素酶檢測試劑 | 10 mL | 50 mL |
FRK001-C/FRK002-C | 海腎熒光素酶檢測緩沖液 | 10 mL | 50 mL |
FRK001-D/FRK002-D | 海腎熒光素酶底物（100×） | 100 μL | 500 μL |
保存條件
-20℃保存，12 個(gè)月有效；海腎熒光素酶底物（100×）建議分裝 -80℃保存。
使用說明
1.裂解細(xì)胞：將細(xì)胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入報(bào)告基因細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
a.對于貼壁細(xì)胞：吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液；對于懸浮細(xì)胞：離心去上清后，參考下表加入適量報(bào)告基因細(xì)胞裂解液。
器皿類型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
細(xì)胞裂解液（微升/孔） | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
冰上孵育5-10 min ，充分裂解細(xì)胞。
注：如果螢光素酶的表達(dá)水平比較低，可以嘗試使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小為100微升。
b.充分裂解后，10,000-15,000×g 離心3-5分鐘，取上清用于測定。（選做）
注：細(xì)胞裂解后可以立即測定螢光素酶，也可以先凍存，待以后再測定。凍存樣品需融解，并達(dá)到室溫后再進(jìn)行測定。裂解產(chǎn)物可在4℃保存12 h，-20℃/-80℃可長期存放。（裂解產(chǎn)物反復(fù)凍融5次無影響）。
2.融解螢火蟲螢光素酶檢測試劑和海腎螢光素酶檢測緩沖液，并達(dá)到室溫。海腎螢光素酶檢測底物(100×)置于冰浴或冰盒上備用。
3.按照每個(gè)樣品需100微升檢測液的量，取適量海腎螢光素酶檢測緩沖液，按照1:100加入海腎螢光素酶檢測底物(100×)配制成海腎螢光素酶檢測工作液。例如，1毫升海腎螢光素酶檢測緩沖液中加入10微升海腎螢光素酶檢測底物(100×)充分混勻后即可配制成約1毫升海腎螢光素酶檢測試劑。
4.取20 μL裂解液加至待檢測的96孔板中，按照實(shí)驗(yàn)需求，可設(shè)置3-5個(gè)重復(fù)孔。
5.加入100 μL螢火蟲螢光素酶檢測試劑，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測盡量在30 min內(nèi)完成。
6.加入100 μL海腎熒光素酶檢測試劑，震板混勻，檢測海腎熒光素酶的活力，檢測盡量在30 min內(nèi)完成。
7.分析數(shù)據(jù)：
①實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，在每個(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對照組的螢火蟲和海腎螢光素酶的發(fā)光測量值。
a.空白對照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲螢光素酶檢測試劑。
背景R：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲螢光素酶檢測試劑+海腎螢光素酶檢測試劑。
注：空白對照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測試劑。
b.實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理(即實(shí)驗(yàn)組F和實(shí)驗(yàn)組R)。
c.對照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果(即對照組F和對照組R)。
②計(jì)算結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)組比值=(實(shí)驗(yàn)組F-背景F）/(實(shí)驗(yàn)組R-背景R)。
對照組比值=(對照組F-背景F）/(對照組R-背景R)。
表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組比值/對照組比值。
注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用；
2.檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同；
3.檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板。黑色酶標(biāo)板也可用，但因黑色會吸收光信號，可能會降低信號；
4.D組分海腎螢光素酶底物易揮發(fā)，注意密封保存；
5.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。
6.本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
螢火蟲熒光素酶檢測試劑盒 | FLK001/FLK002 | 100T/500T |
NLuc熒光素酶檢測試劑盒 | NLK001/NLK002 | 100T/500T |