產品規(guī)格

產品簡介

本產品是一種以PKH26（紅色，Ex/Em:551nm，567 nm）親脂性熒光染料的膜整合標記外泌體，PKH 染料是高度親脂性的長鏈羰花青熒光染料，其中脂肪族尾部可以迅速嵌入暴露的脂質雙層并形成強的非共價相互作用，以用于研究外泌體的靶向、吞噬和運輸機制等，可使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標儀、流式細胞儀等熒光檢測系統(tǒng)進行檢測。

  PKH26也可用于常規(guī)細胞膜標記，用于體外細胞標記和體內細胞追蹤，詳情見細胞膜染料產品。

產品組成

保存條件

  冰袋運輸，-20 ℃ 避光保存，有效期12個月（PKH26母液嚴格避光并擰緊蓋子，防止溶劑揮發(fā)），保存在Dilution C的染色工作液，需在使用前配置，且現配現用。

使用方法

需自備試劑和耗材：

（1）試劑： 1×PBS溶液，BCA蛋白濃度測試試劑盒（可做可不做）

一．外泌體準備及定量（可做可不做）：

為保證最佳的染色效果，需進行BCA蛋白濃度測定以確定外泌體蛋白量，選擇合適的PKH26染色用量。

若為凍干外泌體，使用100 μL的Diluent C液或其他合適溶液（不含血清或BSA的PBS等溶液）分散；若為外泌體溶液，濃縮至合適體積，且保證體系較高的外泌體的純度和濃度，濃度過低可能會影響標記效果。

二．PKH26染料工作液配置

1，試劑盒配備為1 mM（EtOH）的母液，使用前檢查是否結晶，若有結晶，超聲或渦旋直至完全溶解后離心片刻，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失；取適量PKH26母液，先用Diluent C液稀釋10倍，配置為100μM的工作液，取適量的工作液加入外泌體溶液，使用Diluent C液定容，使其體系標記濃度在2~20 μM，推薦嘗試10 μM的終濃度。

如：10 μg外泌體染色，取2 μL母液，用18 μL的Diluent C液稀釋成100μM的工作液，然后取10 μL工作液加入已經稀釋好的100 μL外泌體溶液中渦旋混勻。

注：1，PKH26易水解，工作液需現配現用；2，PKH26標記終濃度需根據不同外泌體、外泌體顆粒數、純度等實驗體系通過預實驗進行優(yōu)化，且避免在很小(<100 μL)或很大(>5 mL)的體積下進行外泌體的標記；3，PKH26母液不可直接加入外泌體溶液中，必須經過Diluent C液稀釋后加入外泌體溶液；4，Diluent C液為親脂性膜染料標記專用液，無生理鹽和緩沖劑，最大化染料溶解性，減少PKH染料的自聚集，因此標記體系盡可能在Diluent C液進行。

三．PKH26染色及終止

加入后孵育1-5分鐘，然后用等體系體積的標記終止液（1% BSA）來結合多余的染料。

注：1，標記孵育時間不可過長，通常不能超過10分鐘，標記時間過長可能會導致外泌體膜完整性喪失；2，以避免未標記的游離PKH26染料后續(xù)直接染色細胞，建議空白設置對照（外泌體溶液換成PBS溶液，其他操作正常）以確定終止效果。

四．去除多余染料

按照外泌體純化方法（如SEC法）再次提取外泌體以去除多余染料或染色終止劑，或使用超濾管去除游離染料。

注：染色后的外泌體體系都需要進行純化處理，未標記的游離PKH26染料后續(xù)將直接染色細胞，所有再次提取純化方法會損失一部分外泌體

注意事項

1．為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護。

2．PKH26易水解，母液建議分裝用封口袋于 - 20 ℃避光保存，工作液且現配現用。

3．PKH26應用廣泛，還用于細胞膜的標記，詳細使用說明見本司細胞膜染料PKH26粉末。

4．本產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內!